25. 購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因？
研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳， 常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或
培養(yǎng)基品質不佳。血清使用錯誤或血清的品質不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后，
加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80℃
太久。
26. 收到之冷凍管瓶身破裂，瓶蓋有裂紋，或瓶蓋脫落之原因？
冷凍管瓶蓋裂紋，或瓶身破裂，可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當，造成
冷凍管裂損，建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫，乃因熱脹冷縮之
物理現(xiàn)象，冷凍管有可能因此而造成細胞污染，故冷凍管于放入和取出液氮桶時，均
應立刻將冷凍管再一次扭緊 。
27. 如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基？
培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在 MEM 中培養(yǎng)的細胞，很可能在 DMEM 或
M199 中同樣很容易生長?？傊?，首選 MEM 做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640 做懸浮細胞培
養(yǎng)是一個好的開始，各種目的無血清培養(yǎng)最好首選 AIM V（12005）培養(yǎng)基（SFM）。
28. L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？
L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的
能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降
解，但是確切的降解率一直沒有最終定論。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成，而氨對
于一些細胞具有毒性。
29. GlutaMAX-I 是什么？培養(yǎng)細胞如何利用 GlutaMAX-I？這個二肽有多穩(wěn)定？
GlutaMAX-I 二肽是一個 L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的 alpha-氨基用 L-丙氨
酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放 L-谷氨酰胺供利用。 GlutaMAX-I 二肽非常
穩(wěn)定，即使在 121 磅滅菌 20 分鐘，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同
條件下，L-谷氨酰胺幾乎完全降解。
30. 什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅？ p
酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為 PH 值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性
時為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用，（特別是雌激素）。為避免
固醇類反應，培養(yǎng)細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾
檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。 31. 培養(yǎng)基中
丙酮酸鈉的作用是什么？
丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，
但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
32. 二價離子抑制胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時加入 EDTA 的目的是什么？ 細胞培養(yǎng)文獻
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二價離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA 用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保
持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前，用 EDTA 清洗細胞，以消除來自培
養(yǎng)基中所有的二價離子。 - ~# @6 \; l6 w* ^
33. 書上說，Hank‘s 平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用，不需要 CO2 培養(yǎng)箱。原因是
什么？Hank’s 平衡鹽溶液(HBS)和 Earle‘s 平衡鹽溶液(EBS)有什么本質的功能差
別？
HBS 和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在 Eagles (2.2g/L)中比在 Hanks
(0.35g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的 CO2 平衡，以維持溶液的 PH 值。Eagles 液在
空氣水平的 CO2 中，溶液會變堿，Hanks 液在 CO2 培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在 CO2
培養(yǎng)箱中保存組織，需要用 Eagles 液，。如果僅僅是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的
組織，用 Hanks 液就可以了。
血清
34. 保存血清最好的方法?
建議血清應保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于 4℃時，請勿超過一個月。若您
一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。35. 如
何解凍血清才不會使產(chǎn)品質量受損?
建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于 2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之
全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
36. 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?( R. r+ k5 |" i- S7 k
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性
所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦
是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質量。若欲
去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以 400g 稍微離心,上清液即
可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因
為它可能會阻塞您的過濾膜。
37. 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞
和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養(yǎng) ES 細胞，昆蟲細
胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。
